VHP滅菌的步驟如下。

①準(zhǔn)備工作。將干燥箱冷阱中的水分清除干凈，使內(nèi)部表面干燥，且溫度均一，測量擱板、箱壁、冷阱盤管等處溫度均在允許范圍內(nèi)（滅菌有效溫度為4~80℃），測試凍干機(jī)與蒸氣發(fā)生器間無泄漏，凍干機(jī)在真空下能維持一段時(shí)間真空度沒有明顯下降。

②滅菌。將凍干機(jī)抽到250Pa以下，將30%的雙氧水放入發(fā)生器，雙氧水在發(fā)生器內(nèi)氣化后通入干燥箱和冷阱，維持一定時(shí)間后放人無菌空氣并排氣。這樣重復(fù)數(shù)次。

③滅菌結(jié)束后，通人無菌空氣，用水環(huán)泵將空氣排出，直至排氣中含雙氧水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.0001%以下。若用油封泵則應(yīng)在泵前加裝觸媒板，使雙氧水分解成水和氧。

④檢驗(yàn)。一般采用生物指示劑檢查滅菌效果，即用耐熱板培養(yǎng)耐熱桿菌孢子，每1cm2板上培養(yǎng)105個(gè)孢子的凍干品，將其懸掛于擬檢驗(yàn)處，箱阱用VHP滅菌后，將其取出放人培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時(shí)到7天，檢驗(yàn)凍干機(jī)該處是否已完全滅菌。